Переведенцев И.С., технический специалист ООО «ФармБаланс»

Невзорова А.А., соискатель, ФГБНУ «Поволжский научно-исследовательский институт производства и переработки мясомолочной продукции»

Сычева А.И., соискатель, ФГБНУ «Поволжский научно-исследовательский институт производства и переработки мясомолочной продукции»

Введение

В современной ветеринарной медицине проблема отравлений химическими веществами занимает одно из ключевых мест. Актуальность изучения данной проблематики обусловлена широким применением токсичных химических соединений в различных сферах деятельности человека, включая сельское хозяйство, медицину, промышленное производство и бытовые нужды. Зачастую неправильное использование и хранение, отсутствие контроля при утилизации токсичных химических соединений становятся причиной острых и хронических отравлений диких и домашних животных, причем механизмы токсического действия таких веществ имеют самую разную природу¹.

Среди всех случаев интоксикаций у животных наиболее часто встречаются отравления кошек и собак. Этиология отравлений разнообразна и включает пищевые и непищевые причины. Непищевые отравления возникают при трансдермальном или ингаляционном контакте с токсичными веществами, в то время как пищевые отравления обусловлены пероральным поступлением токсинов в организм животного². При этом разнообразие ядов достаточно обширное.

Отравления собак и кошек часто связаны с воздействием родентицидов – высокотоксичных химических препаратов, предназначенных для уничтожения крыс и мышей. Эти вещества используются в сельском хозяйстве, на объектах общественного питания, в промышленности и в быту. Уровень смертности при отравлении родентицидами среди домашних животных очень высок. Основной путь интоксикации – поедание приманок, содержащих яд. Кошки могут отравляться, поедая тушки зараженных грызунов. Нередки случаи умышленного отравления родентицидами домашних и бродячих животных человеком^3,4.

После попадания токсикантов в организм животных они всасываются в кровь через желудочно-кишечный тракт, затем аккумулируются в различных тканях и органах, преимущественно в печени и почках. Скорость и продолжительность токсического действия зависят от химической структуры и физико-химических свойств соединений^5,6.

У животных симптомы отравления возникают не сразу. Замедленное действие этих веществ приводит к тому, что к моменту появления первых клинических признаков уже происходят серьезные, часто необратимые токсические изменения во всех органах⁷. В этом заключается коварство случаев отравления родентицидами.

Известно более 30 действующих веществ, используемых в качестве родентицидов. В РФ разрешены к применению только родентициды антикоагулянтного действия – суперварфарины. Антикоагулянтные родентициды классифицируются на первое и второе поколения по дате их появления на рынке. Антикоагулянты первого поколения (варфарин, пиндон и др.) требуют многократного применения для достижения токсического эффекта и быстро выводятся из организма. Соединения второго поколения (бродифакум, бромадиолон, дифенакум, флокумуфан и др.) обладают повышенной токсичностью и замедленной скоростью выведения^1,8,9. По кумулятивной способности антикоагулянты первого поколения уступают родентицидам второго поколения. Например, период полувыведения варфарина у крыс составляет около двух суток, тогда как у бродифакума этот показатель достигает 6 месяцев. У человека период полувыведения бродифакума варьируется от 10 до 69 суток^10,11.

По механизму действия антикоагулянтные родентициды ингибируют витамин К-эпоксид-редуктазный комплекс (VKORC) – фермент метаболического цикла витамина К, который участвует в образовании активной формы витамина К и последующей активации факторов свертывания крови. Снижение активности VKORC нарушает синтез витамина К₁, необходимого для процессов карбоксилирования II, VI, IX и X факторов свертывания крови, а также для активации формирования фибрина^8,9,12. Таким образом, токсический эффект родентицидов обусловлен подавлением активности коагуляционного гемостаза. При истощении запасов витамина К у животных развиваются неспецифические симптомы: слабость, одышка, адинамия, бледность слизистых оболочек, возможно развитие геморрагического синдрома с появлением на коже петехий, кровоизлияний в слизистых оболочках, кровотечений, примесей крови в кале. Нередко возникает острая дыхательная недостаточность, приводящая к отеку легких¹³.

В рамках оказания первой помощи владельцам животных рекомендовано незамедлительно обращаться в ветеринарное учреждение. Диагностика и лечение животных с отравлениями родентицидами зачастую затруднены необходимостью идентификации токсического вещества и подбора соответствующих антидотов. Согласно литературным данным, при изменении коагуляционного профиля наиболее эффективным средством антидотной терапии является витамин К₁. Другие формы этого витамина для лечения животных неэффективны^2,7,14,15.

Метаболическая роль витамина К обусловлена прежде всего его участием в модификации ряда белков свертывающей системы крови и костной ткани¹⁶. В природе витамин К представлен двумя основными группами соединений, отличающимися структурой боковой цепи: фитильная у филлохинонов (витамин К₁, фитоменадион) и полиизопреноидная у менахинонов (витамин К₂).

Несмотря на высокую терапевтическую эффективность витамина К₁ при лечении отравлений родентицидами, его применение в клинической ветеринарной практике затруднено. Это связано с отсутствием в государственном реестре средств для ветеринарного применения необходимых препаратов, содержащих витамин К. В результате ветеринарные врачи вынуждены использовать аналогичные препараты, предназначенные для человека, что удлиняет сроки лечения и затрудняет расчет терапевтических доз.

Для решения этой проблемы отечественная компания «ФармБаланс» разработала первый в РФ лекарственный препарат, предназначенный для лечения животных с отравлениями родентицидами антикоагулянтного действия, – «Сангвения».

Целью проведения эксперимента было определение эффективности препарата «Сангвения» как основного средства антидотной терапии при отравлении животных родентицидами антикоагулянтного действия. Описанное в настоящей статье доклиническое тестирование на лабораторных животных было необходимым этапом перед дальнейшим изучением эффективности лекарственного средства «Сангвения» для собак и кошек.

Материалы и методы

В качестве биологической модели использовали самок аутбредных лабораторных крыс в количестве 70 особей. Возраст животных, использованных в исследовании, составлял 8 недель. Масса тела экспериментальных крыс находилась в диапазоне 180–220 г. Крысы содержались по 5 особей в клетках, каждая из которых была оборудована крышкой с кормовыми углублениями и поилками. Параметры микроклимата в помещении соответствовали рекомендованным для грызунов: температура от 20 до 24 °C и влажность от 45 до 65%¹⁷. Рацион животных включал полнорационный комбикорм ПК-120-2, предназначенный для лабораторных животных (мышей, крыс, хомяков), а также чистую питьевую воду.

В качестве родентицида использовали средство «Абсолон» в виде тесто-брикетов, производимое ЗАО НПО «Гарант» (Россия, Самара), – высокоэффективная, готовая к применению приманка в форме тестообразной массы красного цвета, упакованная в индивидуальные фильтр-пакетики, с содержанием в качестве действующего вещества бромадиолона в концентрации 0,005%. – антикоагулянта 2-го поколения. Основу приманки составляет мука и специально подобранные аттрактанты, делающие приманку максимально привлекательной для грызунов.

Лечение животных при отравлении бромадиолоном осуществляли препаратом «Сангвения», который содержит в 1 мл в качестве действующего вещества 10 мг фитоменадиона (синтетический аналог витамина К₁)^2,7,14.

Эксперимент состоял из двух независимых этапов: 1-й этап – изучение эффективности «Сангвении» при применении препарата с момента появления клинических признаков отравления родентицидами; 2-й этап – изучение эффективности препарата при незамедлительном начале лечения сразу после потребления животными отравленной приманки.

1-й этап. Для этого этапа использовали 50 крыс, которые были разделены на 4 группы по принципу аналогов: группа 1 – 10 голов, группа 2 – 10 голов, группа 3 – 15 голов, группа 4 – 15 голов.

Животным из групп 1, 2 и 3 была скормлена отравленная приманка «Абсолон». Крысы из группы 4 служили отрицательным контролем и не употребляли родентицид. Животным из группы 1 препарат «Сангвения» вводили внутримышечно в дозе 0,5 мл/кг массы тела в момент появления ярких клинических признаков отравления. Крысы из групп 2 и 3 лечения не получали. Группы 1 и 2 предназначались для оценки эффективности препарата по количеству выживших и павших животных. Крысы из групп 3 и 4 были использованы с целью отбора проб крови для гематологического анализа в момент появления клинических признаков отравления. Дополнительно отбирали кровь у выживших крыс из группы 1 и животных из группы 4 в конце эксперимента для анализа динамики изменений в организме крыс, получавших антидотную терапию.

Перед скармливанием отравленной приманки крысам их лишали корма на 18 часов, затем в каждую клетку на 6 часов помещали 5 брикетов «Абсолона». По прошествии 6 часов несъеденные остатки средства были удалены из клеток.

Схема первого этапа эксперимента приведена в таблице 1.

Таблица 1. Схема первого этапа эксперимента по изучению эффективности препарата «Сангвения».   

2-й этап. Для этого этапа эксперимента по принципу аналогов были сформированы 2 группы аутбредных крыс по 10 голов в каждой. Животным было скормлено родентицидное средство «Абсолон». Перед этим крыс лишали корма на 18 часов, затем в каждую клетку на 6 часов помещали 5 брикетов отравленной приманки. По прошествии 6 часов несъеденные остатки средства были удалены из клеток.  Сразу после этого крысам из опытной группы 1 внутримышечно вводили препарат «Сангвения» в дозе 0,5 мл/кг массы тела, что эквивалентно 5 мг/кг фитоменадиона. Инъекции проводили 1 раз в сутки в течение 3 недель. При этом животные из группы 2 служили контролем и не получали данный препарат.

Схема второго этапа эксперимента приведена в таблице 2.

Таблица 2. Схема второго этапа эксперимента по изучению эффективности препарата «Сангвения».

Результаты

Результаты первого этапа эксперимента

После скармливания «Абсолона» за животными осуществлялось ежедневное наблюдение. Первые клинические признаки отравления у крыс появились спустя трое суток после поедания приманки. Основные симптомы включали анемичность видимых слизистых оболочек, кроме того, у одного животного было зафиксировано кровотечение из наружного слухового прохода.

Через четверо суток с момента начала проведения эксперимента состояние крыс, получивших отравленную приманку, резко ухудшилось. В этот день была зафиксирована гибель трех животных в группе 1 и четырех – в группе 2. При вскрытии павших животных были обнаружены скопления геморрагического экссудата в грудной и брюшной полостях.

У выживших крыс начиная с четвертых суток эксперимента наблюдали проявления геморрагического синдрома: парезы задних конечностей, кровотечения из носа и наружного слухового прохода, подкожные гематомы на ступнях задних конечностей, кровоизлияния в глаз.

В момент появления у крыс геморрагического синдрома (4-е сутки после скармливания отравленной приманки) выжившим крысам из опытной группы 1 начали внутримышечно вводить препарат «Сангвения». В первый день применения препарата были сделаны две инъекции каждому животному с интервалом 6 часов в дозе 0,5 мл на 1 кг массы тела, затем инъекции проводились 1 раз в сутки.

Также через четверо суток с момента начала проведения эксперимента были эвтаназированы по 5 крыс из групп 3 и 4 для отбора проб крови. Это было сделано с целью сравнения гематологических показателей (количество лейкоцитов, эритроцитов, содержание гемоглобина, гематокрит) у отравленных и интактных животных. Отобранные пробы крови были подвергнуты общему клиническому анализу на гематологическом анализаторе. Результаты анализа крови, взятой у крыс на момент появления геморрагического синдрома, показали статистически значимое снижение показателей крови у животных, находящихся под действием бромадиолона, по сравнению с интактными крысами: количество лейкоцитов – (13,92 ± 7,48) × 10⁹/л против (34,38 ± 9,17) × 10⁹/л; количество эритроцитов – (4,45 ± 1,59) × 10¹²/л против (6,45 ± 0,34) × 10¹²/л; уровень гемоглобина – 95,20 ± 34,91 г/л против 145,60 ± 5,45 г/л; гематокрит – 26,04 ± 9,02% против 38,80 ± 1,42% (табл. 3). Снижение количества лейкоцитов и эритроцитов, уровней гемоглобина и гематокрита было обусловлено кровопотерей у отравленных животных, вызванной внутренними кровотечениями.

Таблица 3. Результаты анализа крови крыс в течение эксперимента.

Через пять суток после поедания отравленной приманки пали одна крыса в группе 1 и еще две – в группе 2. Подкожные гематомы у выживших особей увеличились, у некоторых была зафиксирована гематурия. Через шесть суток с момента начала проведения эксперимента погибли 3 крысы из группы 2. В течение седьмых и восьмых суток гибели крыс не наблюдали. Через 9 суток погибла последняя особь в группе 2. Падежа животных в опытной группе 1 больше не фиксировали.

Инъекции препарата «Сангвения» крысам из группы 1 продолжали в течение 21 суток, на протяжении этого периода признаки отравления у животных были купированы. В конце эксперимента эвтаназировали по 5 животных из групп 1 и 4 для отбора крови с целью анализа динамики изменений в организме крыс, получавших антидотную терапию. Результаты анализа крови, проведенные по завершении эксперимента, продемонстрировали, что на тот момент у опытных животных количество эритроцитов, уровни гемоглобина и гематокрита оставались более низкими по сравнению с интактными особями, однако отмечалась тенденция к восстановлению этих показателей до уровня крыс, не подвергавшихся воздействию бромадиолона: количество эритроцитов – (5,67 ± 1,04) ×10¹²/л против (6,95 ± 0,39)×10¹²/л; уровень гемоглобина – 131,80 ± 24,25 г/л против 148,00 ± 2,48 г/л; гематокрит – 38,64 ± 6,66% против 41,72 ± 0,46% (табл. 3).

Полученные результаты показали, что в случае начала терапии после появления клинических признаков отравления животных антикоагулянтом эффективность препарата «Сангвения» составляет 60% (табл. 4).

Таблица 4. Эффективность препарата «Сангвения» в эксперименте (начало терапии при появлении у лабораторных крыс клинических признаков отравления).

Результаты второго этапа эксперимента

После скармливания крысам приманки, содержащей антикоагулянт, за животными осуществлялось постоянное наблюдение в течение 21 суток. У крыс из опытной группы 1, получавших препарат «Сангвения», на 4–6-е сутки после поедания отравленной приманки отмечалось образование подкожных гематом в местах инъекции препарата. Прочих признаков отравления антикоагулянтом у этих животных не наблюдали. Гибели крыс в этой группе зафиксировано не было.

В группе крыс, которым препарат не вводили, признаки интоксикации бромадиолоном развивались следующим образом:

• На 4-е сутки после скармливания отравленной приманки у животных появились клинические признаки отравления – подкожные гематомы на ступнях передних и задних конечностей, гематурия, парез задних конечностей, тремор, носовые кровотечения. В этот же день произошла гибель 4 особей из группы 2.
• На 5-е сутки зафиксировали гибель 3 животных. У выживших крыс наблюдались признаки интоксикации, аналогичные описанным выше. Кроме того, у них отмечалась анемия видимых слизистых оболочек и кожи.
• На 6-е сутки пали остальные животные в группе 2.

При вскрытии павших крыс наблюдали скопление геморрагического экссудата в мочевом пузыре, грудной и брюшной полостях.

Таким образом, при использовании препарата «Сангвения» сразу после употребления животными антикоагулянта эффективность препарата составляет 100% (табл. 5).

Таблица 5. Эффективность препарата «Сангвения» в эксперименте (начало терапии сразу после введения антикоагулянта лабораторным крысам).

Выводы

Результаты проведенных исследований продемонстрировали, что без лечения погибают 100% животных, употребивших антикоагулянт в составе отравленной приманки. В случае применения препарата «Сангвения» выживаемость животных составляет 60% при начале терапии в момент обнаружения клинических признаков отравления и 100% – при начале терапии сразу после употребления яда. Терапия витамином К₁, начатая после появления клинических признаков отравления антикоагулянтами (спустя четверо суток после поедания отравленной приманки), способствует нормализации состояния животных и возврату их физиологического состояния к уровню здоровых особей.

Среднесмертельная доза бромадиолона для собак и кошек при внутрижелудочном поступлении кратно превосходит его LD₅₀ для крыс. Это указывает на более высокую токсичность вещества для лабораторных животных по сравнению с домашними питомцами. На основании этого можно сделать вывод, что если препарат «Сангвения» оказался достаточно эффективным для крыс в качестве антидота при отравлении антикоагулянтом, то в отношении собак и кошек его эффективность будет значительно выше.

Таким образом, итоги проделанной научно-исследовательской работы позволяют рекомендовать ветеринарным врачам препарат «Сангвения» в качестве эффективного средства для сохранения жизни и здоровья домашних питомцев при их отравлении родентицидами антикоагулянтного действия. Эффективность терапии напрямую зависит от своевременного начала антидотной терапии: чем раньше начато лечение, тем выше шансы на спасение животного.

Список литературы

1. Бойченко М. В., Бойченко Н. Б. Проблема возникновения и методы предупреждения отравлений у собак. Наука и образование: опыт, проблемы, перспективы развития. Материалы международной научно-практической конференции, посвященной 70-летию ФГБОУ ВО Красноярский ГАУ. Том Часть 2. Красноярск, 2022. С. 394-396. EDN UZYBYD.
2. Дрозд М.Н., Усевич В.М., Баркова А.С., Бурцева Т.В. Эффективность антидотной терапии при отравлении бромдиалоном в эксперименте. Ветеринария Кубани. 2022. № 4. С. 30-33. DOI 10.33861/2071-8020-2022-4-30-33. EDN JPXQSU.
3. Ибишов Д.Ф., Зименков В.А Терапия собак при отравлении изониазидом и антикоагулянтными родентицидами. Пенитенциарная система и общество: опыт взаимодействия. Сб. материалов VI Международной научно-практической конференции, Том II. Пермь: Пермский институт Федеральной службы исполнения наказаний. 2019. С. 19-21. EDN SEIBJS.
4. Мамедова В. В. Патологические изменения внутренних органов у кошки при отравлении антикоагулянтами (клинический случай). Молодёжь XXI века: шаг в будущее: Материалы XXIII региональной научно-практической конференции. Том 3. Благовещенск: Дальневосточный государственный аграрный университет. 2022. С. 187-188. EDN EBBNGD.
5. Матвиенко И.В., Шульга И.В. Воздействие отравляющих веществ на организм человека. Защита и оказания первой помощи пострадавшим. StudNet. 2023. Т. 6, № 3. EDN RACKRL.
6. Головин В.В., Абрамов С.В., Балышев А.В., Лагерева Е.В. Изучение субхронической пероральной токсичности препарата Алтрик-Экстра на лабораторных животных. Российский паразитологический журнал. 2023. Том 17. № 4. С. 510-520. DOI: 10.31016/1998-8435-2023-17-4-510-520.
7. Переслегина И.О., Дубровина Т.С Эффективность применения гамавита в комплексной терапии отравления кошек: клинические случаи. Школа Науки. 2018. № 5(5). С. 8-9. EDN UWQZPQ.
8. Галстян Г.М., Давыдкин И.Л., Николаева А.С. Случай массового отравления антикоагулянтными родентицидами. Гематология и трансфузиология. 2020.Т. 65, № 2. С. 174-189. DOI 10.35754/0234-5730-2020-65-2-174-189. EDN SZGUNP.
9. Войцеховский В.В., Пивник А.В., Филатова Е.А. [и др.] Коагулопатия при интоксикации родентицидами — антагонистами витамина К. Бюллетень физиологии и патологии дыхания. 2020. № 78. С. 161-177. DOI 10.36604/1998-5029-2020-78-161-177. EDN YWYCSX.
10. Шубкина А.В. Одна из причин массовой гибели охотничьей фауны. Хищные птицы в зоопарках и питомниках: Ежегодник, ФГБОУ ВО «Московская государственная академия ветеринарной медицины и биотехнологии — МВА имени К.И. Скрябина»; Евроазиатская региональная ассоциация зоопарков и аквариумов; Союз зоопарков и аквариумов России; ГАУ «Московский зоопарк». Том Выпуск 31. Москва, 2022 С. 69-79. EDN IOKQOP.
11. Ерофеева Е.В., Суркова Ю.Е., Шубкина А.В. Родентициды и гибель диких животных. Успехи современной биологии. 2021. Т. 141, № 5. С. 496-507. DOI 10.31857/S0042132421050021. EDN NAWWTB.
12. Лисова О.С., Зырянова Н.А. Отравление собак антикоагулянтными родентицидами. Достижения молодежной науки для агропромышленного комплекса: сборник LVI научно-практической конференции студентов, аспирантов и молодых ученых. Тюмень: Государственный аграрный университет Северного Зауралья. 2023. С. 79-83. EDN NNNPFX.
13. Войцеховский В.В., Заболотских Т.В., Целуйко С.С. Приобретенные коагулопатии, обусловленные дефицитом К-витаминзависимых факторов свертывания крови. Амурский медицинский журнал. 2019. № 1(25). С. 59-71. DOI 10.22448/AMJ.2019.1.59-71. EDN EIYCRY.
14. Барламов П.Н., Хлынова О.В., Васильева Э.Р. Трудный случай установления этиологии геморрагического синдрома с желудочным кровотечением. Доказательная гастроэнтерология. 2022. Т. 11, № 1. С. 54-59. DOI 10.17116/dokgastro20221101154. EDN CWHGIM.
15. Енин А.В. Особенности диагностики и лечения отравления собак ро-дентицидами. Научный вестник государственного образовательного учреждения Луганской народной республики «Луганский национальный аграрный университет». 2018. № 3. С. 175-181.
16. Коденцова В.М. Витамин К: функциональная роль и пищевые источники. Переработка молока. 2016. № 4(198). С. 48-51. EDN VXCIEL.
17. ГОСТ 33216-2014 Руководство по содержанию и уходу за лабораторными животными. Правила содержания и ухода за лабораторными грызунами и кроликами.